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Imagen de Calcio y expresión de genes en célula única

 

 Profesorado
Dr. Carlos Villalobos Jorge (Coordinador)
Dr. Lucía Núñez Llorente

 

 Descripción de la asignatura
La asignatura es un curso práctico y optativo, adecuado para los alumnos interesados en las técnicas de imagen en el área de Fisiología Celular. La duración es de 1,5 ECTS que se impartirá durante una semana lectiva completa (de Lunes a Viernes), en horario de mañana a razón de 6h/sesión

 

 Requisitos
Haber cursado el modulo Común del Master

 

 Competencias

 

Llevar a cabo medidas de calcio intracelular en células individuales cargadas con el colorante fluorescente fura2 mediante imagen de fluorescencia. Sembrado celular, carga de colorante, perfusión celular, registro de fluorescencia y procesamiento digital de imágenes de fluorescencia.
 
Llevar a cabo medidas de calcio subcelular en células individuales mediante imagen de bioluminiscencia de células que expresan aecuorina-GFP dirigidas a compartimento subcelular. Transfección celular, sembrado, reconstitución con celenterazina, perfusión celular, registro de bioluminiscencia, calibración y procesamiento digital de imágenes de bioluminscencia.
 
Llevar a cabo medidas de expresión génica mediante imagen de bioluminiscencia en células que expresan el gen reportero de la luciferasa bajo el control de un promotor completo o elementos de respuesta a algún factor de transcripción conocido. 
 
Se desarrollan las siguientes competencias generales y específicas:
 
 
C. Generales
C. Específicas
G1
G2
G3
G4
G5
G6
G7
E1
E2
E3
E4
E5
E6
Imagen de Calcio y expresión de genes en célula única
 
X
 
X
X
 
 
 
 
 
 
X
X

 

 Actividades formativas con su contenido en ECTS
Actividades Horas presenciales Horas trabajo autónomo Total
Clases teóricas
2
2
4
Seminarios y practicas
24
8
32
Tutorias
-
-
 
Preparación de examen
-
 
 
Examen y revisión
2
-
2
Total
28
10
38

 

Los alumnos sembrarán líneas celulares modelo que serán utilizadas para los experimentos de imagen de fluorescencia y bioluminiscencia.
Una vez sembradas las células se procederá a su transfección, por un lado, y a la carga con los colorantes fluorescentes.
Los alumnos aprenderán el manejo básico del microscopio invertido, la perfusión con medios celulares y la captura de imágenes de fluorescencia y bioluminiscencia.
Los alumnos aprenderán las bases teóricas para el uso de sondas fluorescentes y bioluminiscentes para la medida de calcio citosólico y subcelular.
Los alumnos aprenderán el manejo del software para el procesamiento de imágenes y los cálculos necesarios para obtener valores de calcio intracelular en células individuales.
Los alumnos aprenderán a realizar experimentos de imagen de fluorescencia y/o bioluminscencia a largo plazo utilizando un incubador adherido a la platina del microscopio para estudiar dinámica de la expresión de genes utilizando imagen de luciferasa.

 

Resultados del aprendizaje
  • Los alumnos serán capaces de llevar a cabo medidas de calcio intracelular y subcelular utilizando la microscopía y la imagen de fluorescencia y bioluminiscencia, así como procesar las imágenes para su análisis.
  • Los alumnos serán capaces de llevar a cabo medidas de dinámica de la expresión de genes mediante imagen de bioluminiscencia.

 

 Sistemas de evaluación
Evaluación continua durante el desarrollo del trabajo en el laboratorio.
Presentación de los resultados de sus propios experimentos.

 

 Contenidos de la materia
 
 
  • Medidas de calcio intracelular utilizando microscopía de fluorescencia.
  • Medicas de calcio subcelular (mitocondrial) utilizando imagen de bioluminiscencia.
  • Medidas dinámicas de la expresión génica mediante imagen de bioluminiscencia.

 

 Comentarios adicionales
 

 

 

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